酿酒酵母醛酮还原酶的克隆表达和酶学性质研究

应向贤，高　亮，张　丽，毛王伟，赵　嫚，汪　钊

doi:10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2017.03.001

发酵科技通讯 >

2017 , Vol. 46 >Issue 3: 129 - 133

DOI: https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2017.03.001

研究报告

酿酒酵母醛酮还原酶的克隆表达和酶学性质研究

展开

浙江工业大学生物工程学院，浙江杭州３１００１４

应向贤（１９７５—），男，浙江永康人，副教授，博士，研究方向为生物催化，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｉｎｇｘｘ＠ｚｊｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ．

基金资助

浙江省新苗人才计划项目（２０１６Ｒ４０３０７４）；浙江省自然科学基金资助项目（ＬＹ１７Ｂ０２００１２

收起

Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　ａｌｄｏ－ｋｅｔｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｆｒｏｍＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ＣＩＣＣ　１００２

Expand

Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００１４，Ｃｈｉｎａ

Fold

摘要

从酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＣＩＣＣ　１００２基因组中克隆获得醛酮还原酶基因，并在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中实现过量表达．重组醛酮还原酶经Ｎｉ－ＮＴＡ亲和层析分离纯化获得高纯度目的蛋白，并对其进行酶学性质表征．该重组酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测为单一条带，分子量为３８ｋＤａ．该酶的最适ｐＨ和最适温度分别为６．０，６０℃，且具有良好的稳定性．１ｍｍｏｌ／Ｌ金属离子Ｃｏ２＋或Ｎｉ　２＋显著提高酶活力．底物特异性分析表明：该重组酶对邻位二酮具有较高活力，其中对酮基泛解酸内酯的比酶活可达２０．５３Ｕ／ｍｇ．

关键词： 酿酒酵母; 醛酮还原酶; 克隆表达; 酶学性质; 酮基泛解酸内酯

本文引用格式

应向贤，高　亮，张　丽，毛王伟，赵　嫚，汪　钊 . 酿酒酵母醛酮还原酶的克隆表达和酶学性质研究[J]. 发酵科技通讯, 2017 , 46(3) : 129 -133 . DOI: 10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2017.03.001

Abstract

Ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ａｎ　ａｌｄｏ－ｋｅｔｏ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｆｒｏｍ　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ＣＩＣＣ　１００２（ＳｃｅＡＫＲ３Ｃ１）ｗａｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ａｎｄ　ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＢＬ２１（ＤＥ３）．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｌｄｏ－ｋｅｔｏ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ＳｃｅＡＫＲ３Ｃ１ｗａｓ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｂｙ　Ｎｉ－ＮＴＡ　ａｆｆｉｎｉｔｙ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ａｎｄ　ａ　ｓｉｎｇｌｅｂａｎｄ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ａ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　３８ｋＤａ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ．Ｔｈｅｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｐＨ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ＳｃｅＡＫＲ３Ｃ１ｗｅｒｅ６．０ａｎｄ　６０ ℃，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｌ　ｉｏｎｓ　Ｃｏ２＋ａｎｄ　Ｎｉ　２＋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ
ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＳｃｅＡＫＲ３Ｃ１ｈａｄ　ｈｉｇｈ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｎ　ｖｉｃｉｎａｌ　ｄｉｋｅｔｏｎｅｓ，ｗｉｔｈ　ａ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　２０．５３Ｕ／ｍｇ　ｕｓｉｎｇｋｅｔｏｐａｎｔｏｌａｃｔｏｎｅ　ａｓ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ．

Key words： Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ; ａｌｄｏ－ｋｅｔｏ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ；ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ; ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ; ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ；ｋｅｔｏｐａｎｔｏｌａｃｔｏｎｅ

Options

文章导航

模态框（Modal）标题

摘要

本文引用格式

Abstract