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• 2015年, 44卷, 第4期
  刊出日期：2015-11-25

    

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  研究报告
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研究报告
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  研究报告

  右旋糖苷修饰胰蛋白酶条件优化及性质研究

  黄继红，张龙飞，王文

  2015, 44(4): 1-5. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.003

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  由于天然酶其异源蛋白的抗原性、易受蛋白酶水解、酶活性较低、稳定性差等原因，严重影响胰蛋白酶的应用范围和效果。为了获取理化性质更稳定的胰蛋白酶，研究了右旋糖苷修饰胰蛋白酶的反应条件和胰蛋白酶修饰前后的酶学性质。结果表明右旋糖苷修饰胰蛋白酶的最优反应条件为：右旋糖苷与胰蛋白酶的摩尔比为1∶2，修饰反应最适pH 为8.0，最适反应温度为35 ℃，最佳修饰时间为4 h，胰蛋白酶保留酶活力56.1%，修饰率为49.2%。修饰后的胰蛋白酶适合温度、pH 值范围变大，热稳定性和酸碱稳定性明显的提高。因而右旋糖苷修饰胰蛋白酶能够增强胰蛋白酶的热稳定性和酸碱稳定性，为胰蛋白酶的修饰提供理论参考并扩展蛋
  白酶的工业应用价值。
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  研究报告

  毕赤酵母生产重组β-半乳糖苷酶的指数补料分批发酵研究

  魏春，刘利峰，孔令民

  2015, 44(4): 6-9. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.004

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  对毕赤酵母重组表达源于植物乳杆菌的β-半乳糖苷酶的5 L 罐高密度发酵进行了研究。建立了甲醇指数补料动力学模型，并考察了不同比生长速率对β-半乳糖苷酶生产的影响。四个不同比生长速率（0.010/h，0.029/h，0.043/h 和0.058/h） 的甲醇指数补料分批发酵结果表明，比生长速率对β-半乳糖苷酶生产具有显著的影响。最大β-半乳糖苷酶产量60 U/mL 在比生长速率为0.029/h 时获得。采用指数补料分批发酵工艺的β-半乳糖苷酶产量优于常规策略下的产量，该工艺在甲醇诱导后期具有明显生产优势。
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  研究报告

  胰脂肪酶抑制剂产生菌的筛选和鉴定

  朱珺，吴石金

  2015, 44(4): 10-14. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.005

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  采用简单快速的改良筛选平板法对土壤来源的微生物进行初筛，选取显色圈有明显变化的菌株进行紫外-可见分光光度法复筛，最终筛选出一株胰脂肪酶抑制剂生产菌株z123。通过菌株的形态、生理生化特性、16S rDNA 序列同源性分析及系统发育进化树鉴定，确定该菌株为枯草芽孢杆菌。研究结果表明，该菌株能够产生抑制胰脂肪酶的活性物质，其发酵产物对胰脂肪酶的抑制率为38.4%，值得进一步研究。
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  研究报告

  无溶剂体系脂肪酶Lipozyme TL IM催化拆分DL-薄荷醇

  李琴，鄢洪德，郑建永，汪钊

  2015, 44(4): 15-18. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.006

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  为提高非水相脂肪酶法拆分DL-薄荷醇反应的底物浓度，建立了以乙酸乙烯酯为酰基供体的无溶剂体系。实验考察了底物浓度、酶量、温度和反应时间等因素对脂肪酶Lipozyme TL IM 动力学拆分DL-薄荷醇的影响，得到最佳反应条件为DL-薄荷醇浓度2.8 mol/L，酶用量0.5 g，反应温度30 ℃，反应时间6 h。此条件下，反应转化率为22.7%，e.e.p为99.1%。脂肪酶Lipozyme TL IM 重复利用20 次，酶立体选择性基本不变，相对酶活为38.7%。
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  研究报告

  葡萄糖异构酶基因的筛选、表达及酶学性质研究

  廖承军，郑微，黄建峰，刘成龙，柳志强，程新平，毛宝军，陈德水

  2015, 44(4): 19-23. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.007

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  通过基因挖掘的方法从NCBI 数据库中筛选得到一株嗜热的葡萄糖异构酶（GI）产生菌株Thermotoga petrophila RKU-1，化学合成该酶的基因并在大肠杆菌E. coli BL21（DE3）中进行可溶性表达。重组葡萄糖异构酶经过Ni-NTA 柱亲和层析分离纯化后，对纯酶进行SDSPAGE检测，结果显示为单一条带，其分子量大小为50.8 kDa。测定了该重组酶对底物D-葡萄糖的活力为19.8 U/mg，并对其酶学性质进行了表征。该酶最适温度和pH 分别为85 ℃和7.0，Co2+对催化活力起着非常重要的作用， 对底物D-葡萄糖的Km值和Vmax值分别为373 mmol/L和13.4 U/mg。在最适条件下，反应在4 h 内达到平衡，果糖得率最高达到53.8%。
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  研究报告

  基于16S rDNA 序列分析和BIOLOG 快速鉴定方法鉴定杭州地区原料乳中嗜冷菌

  叶慧，谢海华，黄俊，刘士旺，毛建卫，楼坚

  2015, 44(4): 24-29. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.008

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  以杭州地区四个牧场的原料乳为对象，采用传统平板法分离培养嗜冷菌，得到嗜冷菌的生长曲线。通过形态学观察及镜检分离纯化出15 株形态各异的菌种。基于16S rDNA 序列分析和BIOLOG 微生物快速鉴定方法，最终鉴定为假单胞菌属、类黄假单胞菌、荧光假单胞菌、乳酸菌等种属。其中假单胞菌属有13 株，为杭州地区原料乳中嗜冷菌的优势菌。
应用开发
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  应用开发

  鞘氨醇单胞菌发酵生产韦兰胶的研究

  董学前，刘元涛，王伟，张永刚，武琳，吉武科，刘建军

  2015, 44(4): 30-33. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.009

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  韦兰胶（welan gum）是由鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas paucimobilis）分泌的一种可溶性胞外多糖。利用实验室优化筛选的一株韦兰胶产生菌Sphingomonas sp. 511，通过单因素实验，研究了韦兰胶发酵工艺条件，得出韦兰胶适宜的发酵条件为：种龄15 h，接种量10%，装液量80 mL（500 mL 摇瓶），初始pH 8.0，摇床转速300 r/min，培养温度32 ℃，发酵时间72 h，在此实验基础上进行10 L 发酵罐的放大试验，韦兰胶产率为25.76 g/L。
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  应用开发

  马铃薯渣酶解液发酵L-赖氨酸的优化

  范瑞杰，张安红，徐庆阳

  2015, 44(4): 34-39. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.010

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  以马铃薯渣酶解浓缩液为碳源，黄色短杆菌为发酵菌株，利用响应面法，分析了总糖（马铃薯渣酶解浓缩液添加量）、硫酸铵和玉米浆优化培养基的最佳组成，进而研究了生物素和二甲基亚砜的最佳用量。最终确定最佳发酵培养基：总糖125.81 g/L，(NH4)2SO4 27.20 g/L，玉米浆18.17 mL/L，生物素180 μg/L，二甲基亚砜18 mL/L，且在发酵18 h 时添加二甲基亚砜较佳，L-赖氨酸产量达到64.99 g/L，说明马铃薯渣可以作为发酵L-赖氨酸的原料。
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  应用开发

  MVR 板式蒸发结晶装置在发酵行业的应用

  李健，宋金虎，韩睿超

  2015, 44(4): 40-42+47. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.011

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  发酵产品生产过程中的蒸发、结晶单元一直以来是生产企业实现节能降耗的关键环节。通过分析MVR 蒸发结晶装置工作原理和工艺设计要点，提出发酵行业MVR 蒸发结晶装置的设计思路，为企业节能、治污指出一条新路子。
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  应用开发

  高产安丝菌素的珍贵束丝放线菌菌种选育

  张金龙，李芳

  2015, 44(4): 43-47. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.012

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  以珍贵束丝放线菌FRCS-025 为出发菌株，采用常压室温等离子体（ARTP）诱变技术对其孢子进行处理，筛选得到了一株安丝菌素AP-3 高产菌株ARTP-054，其产量可达235.16mg/L，较原始菌株FRCS-025 的产量164.12 mg/L，提高了43.3%。以筛选出的ARTP-054 高产菌为出发菌株，进行化学诱变，选取浓度为0.4 g/L 的亚硝基胍对其孢子悬液进行处理，且使用安丝菌素AP-3 支链前体异丁醇进行底物限制性筛选，结合发酵复筛，最终筛得一株安丝菌素AP-3 高产菌株HF-064，产量达287.64 mg/L，较原始菌株产量提高了75.3%。经50 L 发酵罐验证试验，发现诱变后菌株遗传稳定性良好，168 h 产量高达292.36 mg/L。
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  应用开发

  HPLC 法测定霉酚酸有关物质及流动相pH 值的确定

  张红飞，林进南，连子龙，翁杨微，杨斌

  2015, 44(4): 48-50. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.013

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  为确定HPLC 法测定霉酚酸有关物质所用流动相的合理pH 值，配制pH 值为4.5 和5.5的流动相，采用Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm×100A）对霉酚酸进行有关物质的测定，对于同一个样品连续进样6 次，按照面积归一化法进行计算，以霉酚酸百分含量的相对标准偏差（RSD%）来确定流动相的合理pH 值。结果显示采用pH 值为4.5 的流动相进行霉酚酸有关物质的HPLC 测定，其测定结果稳定性好、灵敏度高、重现性好，可用于霉酚酸有关物质的测定。
  
综述
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  综述

  生物素类活性探针在酶分离中的应用研究进展

  朱勍，俞家俊，应向贤

  2015, 44(4): 51-54. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.014

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  酶是一类具有重要意义的生命活性物质，而如何高效快速地从生物体内提取目的酶已成为生物学领域的一个关键性问题。近年来， 越来越多的研究将蛋白质组学的热门技术———活性探针技术运用于酶的分离纯化中。 对近年来研究得最多的链霉素亲和层析相关的活性探针技术应用于酶分离的研究进行了综述，并例举了丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、N-乙酰氨基葡萄糖苷酶、脯氨酰基寡肽酶、组蛋白脱乙酰酶的分离技术及其机理。
  
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  综述

  模拟移动床色谱技术分离果糖研究进展

  姜夏伟，王亚军，郑裕国

  2015, 44(4): 55-60. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.015

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  主要综述了模拟移动床（Simulated Moving Bed, SMB）色谱分离技术从果葡糖浆中分离果糖的应用研究进展。从工作原理、固定相、阀系统、自动化控制、数学模型及工艺参数优化等方面对SMB 技术进行了系统介绍， 为我国的高纯果糖浆和结晶果糖的产业发展提供参考意见。
专题论述
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  专题论述

  氨基酸产业循环经济发展战略研究

  程美科，杨玉岭，岳希金，满德恩，江继辉

  2015, 44(4): 61-64. https://doi.org/10.16774/j.cnki.issn.1674-2214.2015.04.016

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  通过应用循环经济和企业管理的基本原理和相关理论，从菱花集团的经营现状和企业的实际情况出发，通过剖析菱花集团的内外部环境和条件，形成SWOT 分析表格，以此为依据设计出菱花集团发展循环经济规划，并深入分析了菱花集团的循环经济价值链的建设、产业定位和竞争策略。最后总结了菱花集团以科技为驱动走工农商循环经济的特色化道路：工业为农业提供肥料和饲料支撑；农业为工业提供原料支撑，为商业提供安全绿色农产品；商业为工、农业产品提供市场支撑。